HIS標簽蛋白是一種常用于分子生物學、蛋白質(zhì)純化和功能分析中的重組蛋白。HIS標簽是一串由組氨酸（Histidine，簡稱His）殘基組成的短肽鏈，通常為六個或更多個組氨酸殘基（6×His）。這一標簽?zāi)芘c特定的金屬離子（如鎳離子）結(jié)合，從而使得帶有HIS標簽的蛋白質(zhì)能夠在金屬螯合樹脂上特異性地吸附，并通過洗脫步驟實現(xiàn)純化。
由于其簡便、經(jīng)濟的特點，廣泛應(yīng)用于研究中，尤其是在蛋白質(zhì)的表達與純化、抗體制備、蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的研究等方面。
1.小巧簡便：僅由6個組氨酸殘基組成，能夠在不顯著改變目標蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能的情況下進行純化。
2.高度特異性：能與金屬離子（如Ni²?）特異性結(jié)合，因此，可以通過金屬親和層析的方法純化帶有HIS標簽的蛋白質(zhì)，具有很高的選擇性。
3.可逆結(jié)合：通過調(diào)節(jié)pH值或加入競爭性配體（如咪唑），可以使HIS標簽與金屬離子的結(jié)合可逆，這樣可以方便地洗脫純化的蛋白質(zhì)。
純化步驟：
1.蛋白表達：將含有HIS標簽的目標蛋白質(zhì)表達出來，通常在大腸桿菌或其他細胞中表達。
2.細胞裂解：通過超聲破碎、化學裂解或凍融方法將細胞破裂，釋放出目標蛋白質(zhì)。
3.親和層析：將裂解液通過含有金屬離子的親和樹脂進行過濾。HIS標簽與樹脂上的金屬離子結(jié)合，從而將目標蛋白質(zhì)吸附在樹脂上。
4.洗滌：使用緩沖液洗滌去除未結(jié)合的雜質(zhì)蛋白質(zhì)。
5.洗脫：加入咪唑或調(diào)節(jié)pH，使HIS標簽與金屬離子的結(jié)合破壞，從而洗脫純化的目標蛋白。
這種方法的優(yōu)勢在于其高效性、特異性以及對蛋白質(zhì)活性的保護，因此廣泛用于實驗室中的蛋白質(zhì)純化。
HIS標簽蛋白的應(yīng)用：
1.蛋白質(zhì)純化
HIS標簽最常見的應(yīng)用之一就是蛋白質(zhì)純化。通過金屬親和層析法，科研人員可以快速、方便地從復(fù)雜的蛋白質(zhì)混合物中純化出目標蛋白。由于HIS標簽?zāi)軌蚺c金屬離子強烈結(jié)合，且這種結(jié)合是可逆的，因此能夠高效且特異性地分離和回收目標蛋白。
2.蛋白質(zhì)相互作用研究
HIS標簽還常用于蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的研究。通過將標簽蛋白與其他蛋白共同表達，可以使用親和層析法純化出復(fù)合物并進一步分析其相互作用。利用HIS標簽的可親和性，可以對蛋白質(zhì)相互作用進行定量分析，并為進一步的結(jié)構(gòu)研究提供材料。
3.蛋白質(zhì)鑒定與表征
HIS標簽不僅在純化中具有重要作用，還能為蛋白質(zhì)的鑒定和表征提供幫助。通過質(zhì)譜、Westernblot等技術(shù)，帶有HIS標簽的蛋白能夠被準確地識別出來，進一步進行定性分析。
4.提供空間位點的研究
HIS標簽可以在蛋白質(zhì)的N端或C端加入，這些標簽可以為蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)研究提供空間位點。通過HIS標簽與抗體的結(jié)合，可以進行空間定位，幫助研究蛋白質(zhì)在細胞中的定位與功能。
更新時間：2025-07-04
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