技術文章
在生命科學的微觀世界里,乙?;@一神秘的化學修飾過程,如同隱藏在細胞調控網(wǎng)絡中的 “化學密碼",發(fā)揮著關鍵且多樣的作用。
乙酰化是指在酶的催化作用下,將乙酰基(CH?CO-)添加到蛋白質、組蛋白、非組蛋白或其他分子上的化學修飾過程。這一修飾看似簡單,卻能對分子的功能、定位、穩(wěn)定性以及與其他分子的相互作用產(chǎn)生深遠影響。
在蛋白質層面,乙酰化可以調節(jié)蛋白質的活性,改變其與其他分子的結合能力,從而影響信號傳導通路。以組蛋白為例,組蛋白的乙酰化狀態(tài)與染色質的結構和基因表達密切相關。當組蛋白被乙酰化時,染色質結構變得更加松散,使得轉錄因子更容易接近 DNA,進而促進基因的轉錄;反之,去乙酰化則會使染色質結構緊密,抑制基因表達。
除了對基因表達的調控,乙酰化還參與細胞代謝、細胞周期調控、DNA 損傷修復等多個生物學過程。在細胞代謝中,乙?;揎椏梢哉{節(jié)代謝酶的活性,影響細胞內的能量代謝平衡。
鑒于乙酰化在生物過程中的重要性,準確檢測乙酰化水平和位點至關重要。以下是一種常用的乙酰化檢測方案:
樣本準備:根據(jù)研究目的,收集合適的生物樣本,如細胞、組織或體液。對于細胞樣本,需要進行細胞裂解,釋放出蛋白質。對于組織樣本,則需要先進行勻漿處理,再提取蛋白質。在提取蛋白質過程中,要注意保持蛋白質的完整性和活性,可使用合適的蛋白酶抑制劑。
蛋白質分離:采用 SDS-PAGE(十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳)技術對提取的蛋白質進行分離。SDS-PAGE 可以根據(jù)蛋白質的分子量大小將其分離成不同的條帶,便于后續(xù)的檢測分析。
Western Blot 檢測:將分離后的蛋白質轉移到 PVDF(聚偏二氟乙烯)膜或 NC(硝酸纖維素)膜上。然后,使用特異性的乙?;贵w與膜上的乙?;鞍踪|進行孵育,形成抗原 - 抗體復合物。經(jīng)過洗滌去除未結合的抗體后,再加入二抗(標記有熒光素或酶)與一抗結合。最后,通過顯色或熒光檢測來確定乙?;鞍踪|的存在和相對表達量。
質譜分析:如果需要進一步確定乙?;稽c,可以采用質譜分析技術。首先,將蛋白質進行酶解,切成小的肽段。然后,對肽段進行分離和質譜分析。通過質譜圖的解析,可以確定肽段中是否存在乙?;揎椧约耙阴;木唧w位點。
WB result of Acetyllysine Rabbit mAb
Primary antibody: Acetyllysine Rabbit mAb at 1/500 dilution
Lane 1: untreated HeLa whole cell lysate 20 µg
Lane 2: HeLa treated with 500 ng/ml TSA for 4 hours whole cell lysate 20 µg
Secondary antibody: Goat Anti-rabbit IgG, (H+L), HRP conjugated at 1/10000 dilution
Predicted MW: Multiple
Observed MW: Multiple
乙?;鳛樯矬w內重要的化學修飾方式,其檢測對于深入理解生命過程、揭示疾病機制以及開發(fā)新的治療策略具有重要意義。通過上述精準的檢測方案,我們能夠更好地解讀細胞內的 “乙?;艽a",為生命科學的研究和發(fā)展提供有力支持。
杭州斯達特 志在為全球生命科學行業(yè)提供優(yōu)質的抗體、蛋白、試劑盒等產(chǎn)品及研發(fā)服務。依托多個開發(fā)平臺:重組兔單抗、重組鼠單抗、快速鼠單抗、重組蛋白開發(fā)平臺(E.coli,CHO,HEK293,InsectCells),已正式通過歐盟98/79/EC認證、ISO9001認證、ISO13485。
探秘乙?;杭毎{控的 “化學密碼" 與精準檢測之道